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　　近期，百奧賽圖討論了研發(fā)雙抗ADC的原因并正式對外發(fā)布了基于RenLite的雙抗ADC藥物研發(fā)平臺。百奧賽圖期待與合作伙伴攜手，共同加速推進(jìn)雙抗ADC藥物研發(fā)，早日造福病患。

　　1、為什么要做雙抗ADC

　　腫瘤相關(guān)抗原(tumor associated antigen, TAA)是一類在腫瘤細(xì)胞上特異性高表達(dá)的重要成藥靶點。已有諸多靶向TAA的單抗藥物上市，早在1998年獲批的曲妥珠單抗(商品名赫賽汀，Herceptin)便是其中一例，通過靶向腫瘤細(xì)胞表面抗原Her2，阻斷腫瘤細(xì)胞生長，起到治療腫瘤的作用，成為乳腺癌和胃癌的一線治療方案。然而，單抗藥物作用機(jī)制有限且易產(chǎn)生耐藥性，進(jìn)而影響藥物的治療效果。

　　近些年，隨著連接子(linker)和毒素分子(payload)技術(shù)的快速發(fā)展，基于TAA靶點的抗體偶聯(lián)藥物(antibody drug conjugates, ADC)取得了顯著進(jìn)步，到目前為止已經(jīng)有針對11個TAA靶點的14款A(yù)DC藥物獲批上市。

　　ADC藥物的作用機(jī)制是通過具有高內(nèi)吞活性的抗體靶向識別，將毒素分子帶入腫瘤細(xì)胞內(nèi)，再利用毒素分子特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。同時ADC藥物一般采用可裂解的連接子，在胞內(nèi)更高效的釋放毒的同時也可以通過旁觀者效性(bystander effect)實現(xiàn)對臨近腫瘤細(xì)胞的殺傷，增強(qiáng)ADC藥物的治療效果。針對Her2已經(jīng)有三款A(yù)DC藥物獲得FDA批準(zhǔn)，分別是羅氏的Kadcyla，榮昌生物的愛地希和第一三共的Enhertu。

　　與單抗藥物不同，雙特異性抗體(雙抗)可以同時識別一個靶點的兩個表位或是兩個不同的靶點，進(jìn)而通過多種不同的分子機(jī)制產(chǎn)生更好的療效。目前市面上共有3款獲批雙抗藥物，還有超過100個產(chǎn)品處于臨床開發(fā)階段。

　　近些年針對TAA靶點的雙特異抗體也取得了很大的進(jìn)展。例如強(qiáng)生的Rybrevant是一款靶向EGFR和cMET的雙抗產(chǎn)品，通過EGFR和cMET的快速內(nèi)吞同時抑制這兩條重要的腫瘤細(xì)胞生長信號通路，憑借其在臨床一期的優(yōu)異表現(xiàn)快速獲得FDA批準(zhǔn)上市，用于治療具有特定耐藥突變的非小細(xì)胞肺癌患者。

　　結(jié)合了雙抗和ADC優(yōu)勢的雙抗ADC藥物，是一個更為嶄新的概念。

　　一方面通過雙抗更加特異性地靶向腫瘤細(xì)胞，增加藥物的安全性;

　　另一方面通過交聯(lián)作用促進(jìn)兩個靶點的協(xié)同內(nèi)吞，在提高毒素進(jìn)入腫瘤細(xì)胞效率的同時，進(jìn)一步通過減少受體蛋白在細(xì)胞膜上的表達(dá)量來抑制腫瘤細(xì)胞生長信號，達(dá)到更好的治療效果(圖1)�！　�

　　圖1. 雙抗ADC的作用機(jī)制及其優(yōu)勢

　　具有多重優(yōu)勢的雙抗ADC無疑將成為未來創(chuàng)新藥研發(fā)的新熱點。目前這個方向的研究尚處于早期，僅有Merck的EGFR x MUC1雙抗ADC(M1231)剛剛進(jìn)入臨床，臨床前的在研產(chǎn)品也很少。

　　百奧賽圖認(rèn)為主要原因有兩方面：

　　首先是能夠用于雙抗構(gòu)建的抗體骨架分子較少，且靶點非常集中，僅在Her2, Her3, EGFR, MUC1等幾個靶點上有好的可選抗體分子，缺少足夠的“骨架”來快速搭建穩(wěn)定表達(dá)的雙抗ADC分子;

　　其次，目前針對這些分子的抗體大都是通過阻斷活性篩選獲得的，其內(nèi)吞活性是否滿足需求，能否作為ADC藥物的最佳候選抗體分子也尚未可知。

　　百奧賽圖基于共用輕鏈全人抗體小鼠RenLite的雙抗ADC平臺和“千鼠萬抗”計劃，針對以上兩個問題開展了大量的工作，產(chǎn)生了針對眾多靶點的、豐富且適合用于雙抗ADC藥物開發(fā)需求的抗體分子庫，以規(guī)模化開發(fā)雙抗ADC藥物分子。

　　2、基于RenLite平臺的雙抗ADC藥物研發(fā)

　　RenLite小鼠由百奧賽圖利用自主研發(fā)的大片段染色體工程技術(shù)SUPCE(size unlimited precise chromosome engineering)開發(fā)的全人抗體小鼠，其中鼠的重鏈可變區(qū)已經(jīng)被人的重鏈可變區(qū)進(jìn)行了完整的原位替換，鼠的κ輕鏈可變區(qū)原位替換為人的共同固定輕鏈(圖2A)。利用RenLite小鼠產(chǎn)生的全人抗體具有共同的輕鏈，從而可以有效解決雙抗開發(fā)過程中的重鏈和輕鏈錯配的問題，提高組裝正確率。

　　我們的研究結(jié)果顯示，固定輕鏈并不影響抗體在小鼠體內(nèi)完成親和力成熟，RenLite小鼠同野生型小鼠一樣，能夠產(chǎn)生表位豐富且親和力強(qiáng)的抗體。結(jié)合KIH(knobs-into-holes)技術(shù)連接兩個母本單抗的重鏈，可組裝成結(jié)構(gòu)穩(wěn)定具有單抗結(jié)構(gòu)的雙抗分子(圖2B)，保障了后續(xù)ADC藥物偶聯(lián)的方便性和成功率。由此可見，高質(zhì)量的母本單抗元件、簡易的雙抗組裝方法以及單抗結(jié)構(gòu)的雙抗分子，滿足了規(guī)模化開發(fā)雙抗ADC藥物分子的需要。　　

　　圖2. 基于RenLite平臺高通量地產(chǎn)出雙抗ADC

　　百奧賽圖于2020年3月發(fā)起千鼠萬抗計劃，對1000多個潛在可成藥靶點進(jìn)行規(guī)模化的抗體開發(fā)。這其中有200多個TAA靶點，有潛力生成大量的雙抗組合，理論上可達(dá)20000種。為了使母本單抗更適用于后續(xù)雙抗ADC的開發(fā)，除了常規(guī)的靶點親和力篩選外，更增加了對抗體內(nèi)吞能力的評估。大量經(jīng)過各種篩選驗證的ready-to-use的母本共用輕鏈單抗骨架，使得雙抗的組裝更加方便和快速。

　　百奧賽圖已建立起上百種人腫瘤細(xì)胞系和PDX的抗原表達(dá)數(shù)據(jù)庫，以及大量CDX/PDX腫瘤體內(nèi)藥效模型用于雙抗ADC的藥效及安全性評估。此外，我們還建立了自發(fā)腫瘤大動物轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺，對通過小鼠體內(nèi)藥效篩選到的PCC分子進(jìn)一步驗證藥效和安全性，從而縮小臨床前和臨床試驗之間的距離，以提高臨床轉(zhuǎn)化成功率，讓我們在做創(chuàng)新靶點藥物研發(fā)的同時，盡可能降低臨床試驗的風(fēng)險(圖3)�！　�

　　圖3. 百奧賽圖雙抗ADC藥物開發(fā)全流程

　　以百奧賽圖自研的雙抗ADC產(chǎn)品YH012(Her2 x Trop2 ADC)為例：其雙抗骨架比對應(yīng)母本單抗具有更強(qiáng)的內(nèi)吞(共表達(dá)的NCI-N87細(xì)胞系)，表現(xiàn)出靶點協(xié)同性;而在Trop2高表達(dá)、Her2低表達(dá)細(xì)胞系(NCI-H292)，雙抗內(nèi)吞低于Trop2母本單抗，體現(xiàn)出雙抗選擇性(圖4)�！　�

　　圖4. Her2 x Trop2雙抗骨架的內(nèi)吞活性。

　　Her2 x Trop2雙抗骨架具有良好的純度和偶聯(lián)性質(zhì)，半胱氨酸方法偶聯(lián)后DAR值近于4，具有良好的DAR分布(圖5)�！　�

　　圖5. Her2 x Trop2雙抗的純度(SEC-HPLC)和偶聯(lián)后DAR分布(HIC-HPLC)

　　在加速熱穩(wěn)定和低pH條件下，Her2 x Trop2雙抗骨架都顯示出良好的抗體穩(wěn)定性和理化性質(zhì)(圖6)。　　

　　圖6. Her2-Trop2雙抗穩(wěn)定性分析

　　在體外人腫瘤細(xì)胞殺傷試驗中，藥物偶聯(lián)Her2 x Trop2后的雙抗ADC YH012顯示強(qiáng)殺傷，且和單價抗體相比具有顯著差異;同時，YH012的殺傷同樣具有選擇性(圖7)�！　�

　　圖7. YH012體外殺傷

　　在人肺腺癌細(xì)胞NCI-H1975(Her2，Trop2共表達(dá))的CDX小鼠藥效模型中，YH012相比陽性藥ADC(benchmark)、母本單抗ADC均體現(xiàn)出更強(qiáng)和持續(xù)的抗腫瘤作用(圖8)�！　�

　　圖8. YH012在NCI-H1975模型藥效結(jié)果

　　運用公司大動物轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺，我們進(jìn)一步驗證了YH012在自發(fā)腫瘤大動物體內(nèi)的藥效和安全性。在一條乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的犬中，低劑量(3mg/kg, Q2W)治療不能抑制腫瘤生長，而高劑量(6mg/kg, Q2W)給藥后，可以看到腫瘤持續(xù)縮小(圖9)。大動物轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究驗證了YH012的有效性、劑量相關(guān)性和安全性�！　�

　　圖9. YH012在大動物自發(fā)腫瘤模型中的響應(yīng)

　　充足的可選TAA靶點，高質(zhì)量的適用于雙抗ADC藥物形式的雙抗骨架，完善的循證體內(nèi)藥效評估和大動物轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)能力，使得我們能夠快速獲得大量優(yōu)質(zhì)的雙抗ADC PCC分子。我們期待著與全球合作伙伴，深挖創(chuàng)新靶點和分子，共同加速推進(jìn)雙抗ADC藥物的開發(fā)，早日造福病患。